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Title: Actividad interfacial en el Sistema Dodecano-Agua de las mutaciones 6 y 12 de la proteína transmembranal a (OMPA) provenientes de la Bacteria Escherichia Coli.
Authors: Villamizar Gómez, Liseth Daniela.
Keywords: Proteína de membrana externa A (OmpA).
Tensión interfacial.
Biosurfactantes.
Emulsiones O/W.
Etiqueta de histidina.
Issue Date: 2022
Publisher: Universidad de Pamplona - Facultad de Ingenierías y Arquitectura.
Citation: Villamizar Gómez, L. D. (2022). Actividad interfacial en el Sistema Dodecano-Agua de las mutaciones 6 y 12 de la proteína transmembranal a (OMPA) provenientes de la Bacteria Escherichia Coli [Trabajo de Grado Pregrado, Universidad de Pamplona]. Repositorio Hulago Universidad de Pamplona. https://repositoriodspace.unipamplona.edu.co/jspui/handle/20.500.12744/11483
Abstract: The effort to develop products that do not threaten the environment has led researchers to seek new alternatives that can replace petroleum products, among these are biosurfactants, which represent an alternative to replace conventional surfactants. Currently, it has been shown that certain types of proteins are potential biosurfactants, within these are transmembrane protein OmpA, which has been widely investigated (Aguilera-Segura et al., 2016) and through random modifications in its gene has shown better performance. In a previous study by the research group of the Universidad de los Andes, this protein was cloned and random modifications were made to the gene, obtaining that mutants 6 and 12 were potential biosurfactants, having a lower interfacial value than the OmpA protein, these tests were made with the protein extract (unpurified). The interfacial tension affects the mass transfer through the liquid-liquid interface and the stability of dispersed systems, when this tension is reduced with a biosurfactant, the molecule of the dispersed phase is dispersed in the continuous phase in the form of small droplets (Zhao et al., 2022). This project used E. coli BL21 with mutations 6 and 12 that were inducible with isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG), overexpressing the histidine-tagged mutations (encoded on plasmid PET6xHN-N), which were purified by chromatography by affinity, the interfacial tension and its ability to stabilize emulsions at the dodecane-water interface were evaluated. Using proteins as surfactants has positive effects on interfacial tension since when using wash 2 of both mutations, it exhibited a decrease in tension of 9.10 dyn/cm for mutation 6 and 15.15 dyn/cm for mutation 12, unlike tween 20 (petroleum-derived surfactant) that had a decrease in interfacial tension of 22.00 dyn/cm by means of the hanging drop method. With the turbiscan stability index and backscattering light analysis, it was found that the emulsion was more stable with mutation 6 compared to the emulsion prepared with mutation 12.
Description: El empeño por desarrollar productos que no amenacen el medio ambiente llevó a los investigadores a buscar nuevas alternativas que pudieran reemplazar los productos derivados del petróleo, entre estos se encuentran los biosurfactantes, los cuales representan una alternativa para reemplazar a lo surfactantes convencionales (Sarubbo et al., 2022). En la actualidad, se ha demostrado que ciertos tipos de proteínas son potenciales biosurfactantes, dentro de estas se encuentra la proteína transmembranal OmpA, la cual es ampliamente investigada (Aguilera-Segura et al., 2016; Andersen & Otzen, 2014; Cardona Jaramillo et al., 2020) y mediante modificaciones aleatorias en su gen ha mostrado mejor desempeño. En un estudio previo del grupo de investigación de la Universidad de los Andes esta proteína fue clonada y se le realizaron modificaciones aleatorias en el gen, obteniendo que los mutantes 6 y 12 eran potenciales biosurfactantes teniendo un valor interfacial menor que la proteína OmpA, estas pruebas se hicieron con el extracto proteico (sin purificar). La tensión interfacial afecta la transferencia de masa a través de la interfaz liquido-líquido y la estabilidad de sistemas dispersos, al momento de disminuir esta tensión con un biosurfactante la molécula de la fase dispersa es dispersada en la fase continua en forma de pequeñas gotas (Zhao et al., 2022). Este proyecto usó E. Coli BL21 con las mutaciones 6 y 12 que fueron inducibles con isopropil-β-D-tiogalactopiranósido (IPTG), sobreexpresando las mutaciones con colas de histidina (codificada en el plásmido PET6xHN-N), que fueron purificadas mediante cromatografía por afinidad, se evaluó la tensión interfacial y su capacidad para estabilizar emulsiones en la interfaz dodecano-agua. Usar las proteínas como surfactantes tiene efectos positivos en la tensión interfacial ya que al usar el lavado 2 de ambas mutaciones exhibió una disminución de la tensión de 9.10 dyn/cm para la mutación 6 y 15.15 dyn/cm para la mutación 12, a diferencia del tween 20 (surfactante derivado del petróleo) que tuvo una disminución de la tensión interfacial de 22.00 dyn/cm mediante el método de gota pendiente. Con el índice de estabilidad del turbiscan y el análisis de retrodifusión de luz “backscattering”, se obtuvo que la emulsión era más estable con la mutación 6 en comparación a la emulsión preparada con la mutación 12.
URI: https://repositoriodspace.unipamplona.edu.co/jspui/handle/20.500.12744/11483
Appears in Collections:Ingeniería Química

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